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Elabscience谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)比色法測試盒(E-BC-K096-M)產(chǎn)品介紹

 更新時(shí)間:2024-03-18 點(diǎn)擊量:516

Elabscience谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)比色法測試盒適用于檢測血清、血漿、培養(yǎng)細(xì)胞、培養(yǎng)液及動植物組織樣本中的GSH-Px 活力。

GSH-Px的作用是促進(jìn)過氧化氫(H2O2)與還原型谷胱甘肽(GSH)反應(yīng)生成水(H2O)和氧化型谷胱甘肽(GSSG),反應(yīng)式如下圖所示。為了表示酶的活力,可以測定單位時(shí)間內(nèi)底物GSH被氧化的速度。剩余的GSH與二硫代雙硝基苯甲酸(DTNB)發(fā)生反應(yīng),生成黃色的硫代硝基苯甲酸陰離子(TNB),通過測定該陰離子的濃度來計(jì)算GSH的減少量。由于在沒有酶的條件下,GSH也會發(fā)生氧化(非酶反應(yīng)),因此在計(jì)算酶活力時(shí),需要扣除非酶反應(yīng)引起的GSH減少量。

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實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵點(diǎn)

非酶管及酶管加入試劑二離心后的上清液必須澄清。

樣本處理后必須做預(yù)實(shí)驗(yàn)。

試劑一應(yīng)用液必須在 37℃預(yù)溫 5 min

當(dāng)抑制率小于 10%時(shí),可增加樣本量。

操作步驟

酶促反應(yīng):

非酶管:取20μL 1 mmol/L GSH 標(biāo)準(zhǔn)品,加入1.5 mL EP管中;

酶管:取20μL 1mmol/L GSH 標(biāo)準(zhǔn)品,20μL待測樣本,加入1.5 mL EP管中混勻。

將酶管、非酶管及試劑一應(yīng)用液 37℃預(yù)溫5 min。

向酶管和非酶管加入10μL試劑一應(yīng)用液,混勻,37℃準(zhǔn)確反應(yīng) 5 min。

向非酶管加入200μL試劑二和20μL 待測樣本,混勻;向酶管加入200μL試劑二,混勻。

3100×g離心0 min,取100μL上清液作顯色反應(yīng)。(若上清液中含有部分沉淀物,將上清液轉(zhuǎn)入新的EP管中,再次離心)

顯色反應(yīng):

標(biāo)準(zhǔn)孔:取100μL不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品,加入到對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)孔中:

非酶孔:取100μL非酶管中的上清,加入到非酶孔中;

酶孔:取100μL酶管中的上清,加入到酶孔中。

向步驟①中各孔分別加入100μL試劑三。

向步驟②中各管分別加入50μL試劑四。

酶標(biāo)儀上震板10 s,靜置5 min,酶標(biāo)儀412 nm,測其吸光度值。

注:當(dāng)樣本抑制率小于10%時(shí),可增加樣本量進(jìn)行檢測。

產(chǎn)品選購:

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

E-BC-K096-M

谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)比色法測試盒

48T(16 samples)

96T(40 samples)


產(chǎn)品名

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